說 明

α-Amylase，系統(tǒng)名稱為1,4-α-D-葡聚糖葡聚糖水解酶，別名為液化型Amylase、液化酶、α-1，4-糊精酶。黃褐色固體粉末或黃褐色至深褐色液體，含水量5%~8%。溶于水，不溶于乙醇或乙mi。α-Amylase是哺乳動物的一種主要消化酶，人體中Amylase水平的增加與唾液腺創(chuàng)傷，及唾液腺、胰腺發(fā)炎和腎功能衰竭引起的腮腺炎有關(guān)。本公司的α-Amylase測試盒運(yùn)用α-Amylase裂解一種不溶性藍(lán)色直鏈淀粉成可溶性有色產(chǎn)物，在595nm處的吸光強(qiáng)度與樣品中Amylase的活性成正比。檢測范圍2 - 300 U/L。

應(yīng) 用

直接檢測血清、血漿、唾液、尿液和其它生物樣品中α-Amylase的活性。

試劑盒組成與保存

底物試劑:   10 mL                              2-8°C保存

終止試劑:      5 mL                      2-8°C保存

校準(zhǔn)液:  2 mL (相當(dāng)于 550 U/L)               2-8°C保存

檢測步驟

樣品準(zhǔn)備：新鮮的樣品最為理想。 冷凍條件下，α-Amylase一個(gè)月內(nèi)保持穩(wěn)定。EDTA, EGTA和檸檬酸鹽是α-Amylase的抑制劑，在樣品準(zhǔn)備中應(yīng)避免使用。

1. 反應(yīng)：在標(biāo)記好的1.5mL離心管中加入10 mL 樣品。然后加入 190 mL 底物試劑，振蕩混合后培養(yǎng)5分鐘。

注意：底物試劑包含的藍(lán)色不溶性物質(zhì)會形成沉淀。量取前應(yīng)當(dāng)?shù)怪闷?/span>10數(shù)次以使底物維持懸浮狀，再迅速將底物轉(zhuǎn)移到樣品離心管。如果測試要在 37°C下進(jìn)行，應(yīng)在添加樣品之前將底物加熱至該溫度。

 對空白對照管，需加10 mL水, 190 mL 底物試劑和 80 mL 終止試劑?；蛘甙匆韵马樞驕?zhǔn)備空白對照：10 mL 樣品， 80 mL 終止試劑和190 mL 底物試劑。 如果樣品背景顏色是明顯的藍(lán)色，這一步很必要。

2. 將80 mL 終止試劑加入每個(gè)樣品離心管中。振蕩混合并以14,000 rpm速度離心5分鐘，小心地將200 mL 上清液轉(zhuǎn)移至透明平底96孔板的孔中。

3.在不同的孔中，加入200 mL 水和 200 mL 校準(zhǔn)液。讀取595nm 處吸光度。

4. 濃度計(jì)算: α-Amylase活性計(jì)算如下：

OD樣品 和OD空白 分別是樣品和空白的OD595nm 值，OD校準(zhǔn)液 和 ODH2O 分別是校準(zhǔn)液和水的OD595nm值。n 是稀釋系數(shù)，“550" 是校準(zhǔn)液在測試環(huán)境下的等效活性(U/L)。

注：如果計(jì)算出的活性高于300 U/L，將樣品用水稀釋后重復(fù)測試，結(jié)果需要乘以稀釋系數(shù)n。

單位定義：在測試環(huán)境下(pH 7.0)，一個(gè)酶活性單位是指每分鐘催化產(chǎn)生1 mmole 產(chǎn)物。

注意事項(xiàng)：本產(chǎn)品僅供研究用，使用過程中應(yīng)嚴(yán)格遵循實(shí)驗(yàn)安全措施。